생선 새우 달콤한 민감도 0.01ppb 96Wells/Kit을 위한 니트로푸란 AOZ 키트 시험 ELISA

생선 새우 달콤한 민감도 0.01ppb 96Wells/Kit을 위한 니트로푸란 AOZ ELISA 시험 키트

 

1. 원리

이 Ｆ오로드 안전 신속 시험 장비샘플에 AOZ의 탐지를 위한 경쟁적 효소 면역 분석법을 기반으로 합니다. 결합 항원은 마이그로 웰 종류에 사전 코팅합니다. 마이그로 웰에 사전 코팅한 항원이 스트라이핑하는 샘플과 결합에서 AOZ는 안티-AOZ 항체와 경쟁합니다. 효소 접합체의 추가 뒤에, TMB 기질은 채색에 추가됩니다. 샘플의 사진 농도 (OD) 가치는 그 안에서 AOZ로 네가티브 상관을 가지고 있습니다. 이 가치는 표준 곡선과 비교되고 AOZ 집중이 다음에 획득됩니다.

2. 성분

1	마이그로 웰 스트립	제거할 수 있는 8와 12 스트립 웰 각각
2	6× 표준 해결책 (1mL 각각)	0ppb	0.01ppb
		0.03ppb	0.09ppb
		0.27ppb	0.81ppb
3	효소 접합체	7 밀리람베르트	레드 캡
4	항체 사용 가능 솔루션	7 밀리람베르트	블루캡
5	기판 A	7 밀리람베르트	하얀 모자
6	서브스트레이트비	7 밀리람베르트	검은 모자
7	정지 용액	7 밀리람베르트	노란 캡
8	20× 집중된 세척 버퍼	40 밀리람베르트	하얀 모자
9	2× 집중된 레디스솔비왕 솔루션	50 밀리람베르트	투명캡
10	2-Nitrobenzaldehyde(C7H5NO3)	10 밀리람베르트	검은 모자

 

3. 기술적 요구

민감도 : 0.01ppb

인큐베이션 온도 : 25C

인큐베이션 시간 : 30min~15min

검출 한계

조직, 달걀, 꿀 : 0.05ppb

교차-반 작용 비율

AOZ 100%

아모스 <0>

AHD <0>

SEM <0>

회수율

조직, 달걀 95±25%

꿀 85±23%

 

4. 요구되지만 제공되지 않는 재료

1) 장비 :미소 평판 해독기, 측정하는 프린터, 균질기, 질소 -드라이링 장치, 소용돌이, 원심분리기는 피펫으로 계량하고 0.01 Ｇ), 인큐베이터, 수조의 감량을 균형화시킵니다 ;

2) 마이크로피펫 : 단일 채널 20-200 uL과 100-1000 uL과 다채널 30~300 ul ;

3) 시약 : 나오하, 아세트산 에틸, n-헥산, HCI (대략 36.5%), K2HPO4·3H2O

 

5. 샘플 예비 처리

교육

다음과 같은 포인트는 어떠한 약간 표본의 예비 처리 전에 거래하여야 합니다 :

1) 단지 일회용 팁은 실험을 위해 사용될 수 있고 다른 시약을 흡수해서 사용될 때 팁이 바뀌어야 합니다 ;

2) 실험 전에, 각각 실험용 장치는 깨끗하고, 실험 결과를 방해하는 오염물을 회피하기 위해, 필요한 경우 재청소되어야 합니다.

샘플 예비 처리 전에 용액 사전 준비 :

1) 0.1 Ｍ K2HPO4 : 500mL에 11.4 Ｇ K2HPO4·3H2O를 탈염수에 녹이세요.

2) 1 Ｍ 하크들 : 100mL에 8.6mL HCI (대략 36.5%)를 탈염수에 녹이세요.

3) 1 Ｍ 나오하 : 100mL에 4g 나오하를 탈염수에 녹이세요.

4) 2×concentrated 레디스솔비왕 수용액은 표본 레디스솔비왕을 위해 사용되는 1시 1분 (1mL 집중된 레디스솔비왕 수용액 + 1mL 탈염수)에 탈염수로 희석됩니다.

 

5.1 샘플 준비

a)조직, 달걀

1) 균질화 표본의 무게 1± 0.05g가 2 분 동안 적당히 증류수, 0.5mL 1 Ｍ HCI 중 4mL과 각각 튜브, 쉐이크에 대한 100uL 2-니트로벤즈알데히드 (C7H5NO3)를 추가합니다.;.

2) (approx16 시간) 아침까지 at37C를 배양하거나 수조 (2 시간)까지 at56C를 배양하세요.

3) 30대를 위해 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M 나오하와 6mL 아세트산 에틸을 각각 튜브, 쉐이크에 더하세요.

4) 10 분 동안 실온 (20-25 C)에 있는 4000r/min 이상 원심분리기는 유화가 있거나 초산에틸층이 3 밀리람베르트에 대해 충분하지 않(면, 반복해서 10 분과 원심분리기 동안 80Cwater 베스에 샘플을 배양하세요 ; 또는 증가는 원심분리기의) 시간을 가속시키고 확장합니다.

5) 아세트산 에틸의 열전달 3mL은 새로운 원심 튜브 안으로 층을 이루고, 50C에 질소 또는 공기에 의해 건조로 증발합니다.

6) 건조 잔사를 2mL n-헥산에 녹이, 약해진 레디스솔비왕 솔루션 중 1mL, 적당히 30 초 동안 혼합, 10 분 동안 실온 (20-25 C)에 있는 4000개 Ｒ / 분 위에 원심분리기가 덧붙입니다 ; 윗계층 n-헥산 단계를 제거하세요 (윗계층 n-헥산 단계를 제거한 후의, 유화가 있다고 10-20min, 반복해서 원심분리기를 위한 70Cwater 베스에 있는 샘플이 잠복하면).

7) 분석을 위해 더 낮은 것의 50 uL을 잡으세요.

샘플의 희석의 폴드 : 2

 

b) 꿀

1) 균질화 표본 (꿀)의 무게 2± 0.05g가 2 분 동안 적당히 증류수, 0.5mL 1 Ｍ HCI 중 4mL과 각각 튜브, 쉐이크에 대한 100 uL 2-니트로벤즈알데히드 (C7H5NO3)를 추가합니다.;.

2) (approx16 시간) 아침까지 at37C를 배양하거나 수조 (2 시간)까지 at56C를 배양하세요.

3) 30대를 위해 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M 나오하와 6mL 아세트산 에틸을 각각 튜브, 쉐이크에 더하세요.

4) 10 분 동안 실온 (20-25C)에 있는 4000r/min 이상 원심분리기는 유화가 있거나 초산에틸층이 3 밀리람베르트에 대해 충분하지 않(면, 반복해서 10 분과 원심분리기 동안 80Cwater 베스에 샘플을 배양하세요 ; 또는 증가는 원심분리기의) 시간을 가속시키고 확장합니다.

5) 아세트산 에틸의 열전달 3mL은 새로운 원심 튜브 안으로 층을 이루고, 50 Ｃ에 질소 또는 공기에 의해 건조로 증발합니다.

6) 건조 잔사를 2mL n-헥산에 녹이, 약해진 레디스솔비왕 솔루션 중 1mL, 적당히 30 초 동안 혼합, 10 분 동안 실온 (20-25 C)에 있는 4000r/min 이상 원심분리기가 덧붙입니다 ; 윗계층 n-헥산 단계를 제거하세요 (윗계층 n-헥산 단계를 제거한 후의, 유화가 있다고 10-20min, 반복해서 원심분리기를 위한 70Cwater 베스에 있는 샘플이 잠복하면).

7) 분석을 위한 더 낮은 것의 50 uL을 잡으세요.

샘플의 희석의 폴드 :1

 

6. ELISA 절차

6.1 교육

1) 사용 전에 모든 시약과 마이그로 웰 스트립을 실온 (20-25 C)에 가져오세요 ;

2) 사용 뒤에 바로 모든 시약을 2-8 Ｃ로 되돌리세요 ;

3) 큰 도에, ELISA 해석의 재현성은 플레이트 세척의 일관성에 의존합니다. 플레이트 세척의 정동작 ELISA에서 핵심 사항이 절차이고 ;

4) 일정온도에 있는 인큐베이션을 위해, 모든 표본과 시약은 빛 노출을 피할 것이고 각각 마이크로플레이트가 덮개 막에 의해 밀봉되어야 합니다.

 

6.2 작업 과정

1) 시험 키트를 적어도 30의 분을 위한 실온 (20-25 C)에 가져오고 각각 시약이 사용 전에 고르게 혼합되기 위해 흔들리고 필요한 마이그로 웰 스트립을 플레이트 프레임에 넣어야 한다는 것에 주목합니다. 사용하지 않은 마이크로플레이트를 재실링했고 동결되지 않는 2-8 Ｃ에 저장합니다.

2) 용액 사전 준비 : 1시 19분 (1 부분 20 × 집중된 세척 버퍼 + 19 부분 물 이온 제거)에 20 × 집중된 세척 버퍼 중 40mL을 탈염수로 희석시키세요. 또는 필요에 따라 준비합니다. .

3) 달하는 것 : 표본과 표준 해결책에 따라 마이그로 웰을 넘버링하세요 ; 각각 표본과 표준 해결책은 정부 2통으로 수행되고 그들의 위치들을 기록하여야 합니다.

4) 표본 또는 표준 해결책의 50 uL을 분리된 중복웰에 부가하세요 ; 50 ul 효소가 그리고 나서 항체 사용 가능 솔루션의 50 uL을 결합시킨다고 덧붙이고로 각각 잘, 손으로 플레이트를 흔들음으로써 점잖게 혼합됩니다. 마이크로플레이트를 덮개 막으로 밀봉하고 25 Ｃ for30min에 앤드인큐베레이트.

5) Pour liquid out of microwell, flap to dry on absorbent paper, add 250 µL/well of washing buffer to wash microplate for 15-30 s, then take out and flap to dry with absorbent paper, repeat 4-5 times. (If there are the bubbles after flapping, cut them with the clean tips).

6) 채색 : 기판의 50 uL을 추가합니다 기판 비의 그런 다음 50 uL으로 각각 잘. 손으로 플레이트를 흔들음으로써 점잖게 혼합되고 채색을 위해 저녁녘에 25 Ｃ for15min에 잠복하세요.

7) 확정 : 정지 용액의 50 uL을 추가합니다로 각각 잘. 손으로 플레이트를 흔들음으로써 점잖게 혼합되세요. 모든 웰의 OD 가치를 결정하기 위해 미소 평판 해독기의 사고 방식을 450nm에 설정하세요. (5 분 이내에 이중 파장 450/630nm에 OD 가치를 읽기 위해 추천하세요).

 

7. 결과 심판

결과를 판단하기 위한 2가지 방법이 있습니다 : 첫번째 것이 거친 판단인 반면에, 초는 정량적 결정입니다. 샘플의 OD 가치가 AOZ 집중으로 네가티브 상관을 가지고 있다는 것에 주목하세요.

7.1 정성 측정

AOZ의 농도 범위 (ng/mL)는 일반적인 샘플의 OD 가치를 표준 해결책의 그것과 비교하는 것으로부터 획득될 수 있습니다. OD가 샘플이의 가치는 0.3 이고, 샘플이이의 그것은 1.0 이라고 추정할 때, 표준 해결책의 OD 가치는 다음과 같습니다 : 0ppb를 위한 2.243, 0.01ppb를 위한 1.816, 0.03ppb를 위한 1.415, 0.09ppb를 위한 0.74, 0.27ppb를 위한 0.313, 0.81ppb를 위한 0.155가 따라서 샘플이의 농도 범위는 0.27ppb 내지 0.81ppb이고 샘플이이의 그것이 0.03ppb 내지 0.09ppb입니다.

7.2 정량적 결정

흡 광도 값의 평균 값은 일반적인 (0 기준) 첫번째 표준 해결책의 OD 가치 (B0)에 의해 나눠지고 다음에 100%까지 증가한 표본과 표준 해결책의 OD 가치 (B)에 대해 획득됩니다, 그것이 있습니다,

 

흡 광도 값의 비율 =	비	×100%
	B0

 

일반적인 샘플 또는 표준 해결책의 OD 가치 비

B0 일반적인 0 ng/mL 표준 해결책의 OD 가치

각각 Y-축과 X-축으로서 표준 해결책의 흡수 백분율과 AOZ 표준 해결책 (ng/mL)의 반로그 가치와 표준 곡선을 작성되세요. 그것의 흡수 백분율을 표준 곡선에 통합시킴으로써 표준 곡선으로부터의 샘플의 상응하는 집중을 읽으세요. 다음에 마침내 AOZ 집중을 샘플에서 획득하면서, 결과값은 상응하는 희석 폴드에 의해 증가합니다.

 

8. 예방책

1) 25 Ｃ 아래에 있는 실온 또는 실온 (20-25 C)로 되돌아 가지 않는 시약과 표본의 온도는 더 낮은 규범 OD 가치로 이어질 것입니다.

2) 세척 프로세스에서 마이크로플레이트의 건조는 연결이 잘되지 않는 표준 곡선과 탐탐치 않은 재현성을 포함하는 상황을 동반할 것입니다 ; 그럼 씻은 후 바로 다음 단계에 계속되세요.

3) 고르게 혼합되시오 그러면 그렇지 않았다면 탐탐치 않은 재현성이 있을 것입니다.

4) 정지 용액은 2가지 Ｍ 황산 용액이고 외피로 접촉을 피합니다.

5) 그것의 예정 만료일을 초과하는 장비를 사용하지 마세요. 장비로부터의 약해지거나 불순한 시약의 이용은 민감도와 감지 OD 가치의 변경으로 이어질 것입니다. 사용하기 위한 다른 다량의 장비로부터 시약을 교환하지 마세요.

6) 사용하지 않은 마이크로플레이트를 재-밀봉에 대한 오토-씰링 가방에 넣습니다 그것. 표준 해결책과 무색인 발색제는 광 감응이고 그러므로 그들이 빛을 직접적으로 향하고 있을 수 없습니다.

7) 이용액의 퇴행을 보여주는 어떠한 색과 착색 솔루션을 포기하세요. 0.5하의 표준 해결책 1 (0 PPB (단위))의 감지 가치는 그것의 퇴행을 보여줍니다.

8) 최적 반응 온도는 25 Ｃ이고 또한 높 또는 또한 저온이 감지 력과 OD 가치의 변화의 결과가 될 것입니다.

 

9. 저장과 예정 만료일

저장 : 동결되지 않는 2-8 Ｃ에 저장하세요.

예정 만료일 : 12개월 ; 생산의 날짜는 박스에 있습니다.

기록 : 만약 마이크로플레이트의 진공 패키지가 누출을 가지고 있다면, 사용하도록 여전히 유효하고 테스트 결과에 영향을 미치고 있지 않고 사용하기 위해 이완됩니다.

 

 

Q1 : 얼마나 오래 그것이 운반하기 위해 당신이라고 생각할 것입니까?
A1 : 7 근무일 이내에 보통 선박.

 

Q2 : 당신은 OEM / ODM을 지원합니까?
A2 : 지원받을 수 있습니다. 우리는 당신의 특정 필요와 특정한 수량에 따른 것 특화할 수 있습니다.

 

Q3 : 품질 관리의 관점에서 하는 당신의 공장은 어떻습니까?
A3 : 우리는 지금까지 모든 생산이 처리한 ISO9001 인증과 ISO13485 인증을 가지고 있습니다, 표준 규칙을 가지고 있습니다, 정부의 적절한 행동과 법에 따릅니다.

 

Q4 : 애프터 서비스가 보증됩니까?
A4 : 우리는 전문적 온라인 기술적 애프터 서비스를 제공합니다. 만약 제품이 실험 동안 실패하면, 우리가 공급할 수 있습니다
전화, 비디오와 다른 형태를 통한 상관적 유도.

 

Q5 : 당신의 최소 명령량이 무엇입니까?
A5 : 1Kit.

 

Q6 : 배송 방법이 무엇입니까?
A6 : 그것은 (페덱스, UPS, DHL, EMS, 기타 등등) 빠른 우편으로 또는 공중과 지상에 의해 수송될 수 있습니다.주문하기 전에 우리와 함께 확인하세요.